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小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗方法及結果分析

張輝
錄入時間:2021-1-20 10:10:56 來源:青島海博生物

一、簡介


  小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica),簡稱小腸耶爾森氏菌,是革蘭氏陰性桿菌或球桿菌,大小為1-3.5×0.5-1.3μm,多單個散在,有時排列成短鏈或成堆。本菌不形成芽胞,無莢膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30℃以下培養條件形成,溫度較高時即喪失,因此表現為30℃以下有動力,而35℃以上則無動力。該菌是能在冷藏溫度下生長的少數幾種腸道致病菌之一,在4℃條件下能保存和繁殖。小腸耶爾森氏菌在自然界分布很廣。


二、參考標準


  《GB 4789.8-2016 食品安全國家標準 小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗》


三、檢驗方法以及結果分析


  1.分離


  將樣品進行梯度稀釋后,選擇合適的稀釋度涂布CIN-1瓊脂平板和改良Y 瓊脂平板,26℃±1℃培養48h±2h。


  小腸耶爾森氏菌典型菌落在CIN-1上為深紅色中心,周圍具有無色透明圈(紅色牛眼狀菌落),菌落大小為1mm~2mm,在改良Y瓊脂平板上為無色透明、不黏稠的菌落。如圖1所示:


A:CIN-1瓊脂平板;B:改良Y瓊脂平板

圖1 

  2.改良克氏雙糖試驗


  分別挑取CIN-1瓊脂平板和改良Y瓊脂平板的可疑菌落3個~5個,分別接種于改良克氏雙糖鐵瓊脂,接種時先在斜面劃線,再于底層穿刺,26℃±1℃培養24h,將斜面和底部皆變黃且不產氣的培養物做進一步的生化鑒定。如圖2所示:


小腸耶爾森氏菌改良克氏雙糖試驗結果

圖2 


  3.尿素酶試驗和動力觀察


  用接種環挑取可疑培養物,接種到尿素培養基中,26℃±1℃培養2h~4h。將尿素酶試驗陽性菌落分別接種于兩管半固體培養基中,于26℃±1℃和36℃±1℃培養24h。將在26℃有動力而36℃無動力的可疑菌培養物劃線接種營養瓊脂平板,進行純化培養,用純化物進行革蘭氏染色鏡檢和生化試驗。


  小腸耶爾森氏菌尿素酶試驗陽性,培養基變為玫紅色,如圖3所示:


左:空白對照;右:小腸耶爾森氏菌

圖3


  小腸耶爾森氏菌穿刺接種于半固體瓊脂中,在26℃培養有動力而在36℃培養無動力,如圖4所示:


A:空白對照;B:小腸耶爾森氏菌

圖4

  4.生化鑒定


  從營養瓊脂平板上挑取單個菌落接種生化反應管,生化反應在26℃±1℃進行。小腸耶爾森氏氏菌的主要生化特征以及與其他相似菌的區別見表1。

表1 小腸耶爾森氏氏菌與其他相似菌的生化性狀鑒別表

項目

小腸耶爾森氏氏菌

中間型耶爾森氏菌

弗氏耶爾森氏菌

克氏耶爾森氏菌

假結核耶爾森氏菌

鼠疫耶爾森氏菌

動力(26℃)

+

+

+

+

+

-

尿素酶

+

+

+

+

+

-

V-P試驗(26℃)

+

+

+

-

-

-

鳥氨酸脫羧酶

+

+

+

+

-

-

蔗糖

d

+

+

-

-

-

棉子糖

-

+

-

-

-

d

山梨醇

+

+

+

+

-

-

甘露醇

+

+

+

+

+

+

鼠李糖

-

+

+

-

-

+

注:+陽性;-陰性;d有不同生化型。


  使用海博生化管進行生化鑒定,小腸耶爾森氏菌生化反應結果為鳥氨酸脫羧酶陽性、蔗糖陽性、棉子糖陰性、山梨醇陽性、甘露醇陽性、鼠李糖陰性和V-P試驗陽性(26℃)。如圖5所示:

A:空白對照;B:小腸耶爾森氏菌

圖5

 

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