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出口食品中霍亂弧菌檢驗方法



錄入時間:2009-2-17 13:13:23 來源:青島海博生物

一、培養基明細:
   名稱                         規格                  價格(元)
堿性蛋白胨水(APW)           250g                     70
TCBS瓊脂                      250g                     95
三糖鐵瓊脂(TSI)             250g                     85
雙糖鐵瓊脂(KIA)             250g                     85
T1N1瓊脂                      250g                     85
精氨酸葡萄糖斜面瓊脂(AGS)   100g                     385
Hugh-Leifson葡萄糖肉湯(HLGB)  *                       *
MR-VP肉湯                     20支                     15
ONPG胨水                      20支                     35
Andrade氏糖類肉湯             250g                     80
Andrade氏指示劑               100ml                    50
氧化酶試劑                     1g                      50  
粘絲試驗溶液                    *                       *
革蘭氏染色液                   5ml*8                    40
5%紅細胞生理鹽水                *                       *
50萬單位多黏菌素B紙片           *                       *
10ug和150ugO/129紙片            *                       *
霍亂弧菌診斷血清(O1群)       1ml*12                   480
霍亂弧菌診斷血清(O139群)      1ml                     50
二、備注:
1、依據SN/T 1022—2001出口食品中霍亂弧菌檢驗方法 適用于出口水產品及其它食品的檢驗。
2、術語:
   霍亂弧菌:為革蘭氏陰性菌,菌體彎曲呈弧狀或逗點狀,菌體一端有單根鞭毛和菌毛,無莢膜與芽胞。經人工培養后,易失去弧形而呈桿狀。細菌運動極為活潑,呈流星穿梭運動。營養要求不高,在PH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或平板中生長良好。因其他細菌在這一PH不易生長,故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養基。在堿性平板上菌落直徑為2mm,圓形,光滑,透明。 
  霍亂弧菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,靛基質反應陽性,當培養在含硝酸鹽及色氨酸的培養基中,產生靛基質與亞硝酸鹽,在濃硫酸存在時,生成紅色,稱為霍亂紅反應,但其他非致病性弧菌亦有此反應,故不能憑此鑒定霍亂弧菌。EL Tor型霍亂弧菌與古典型霍亂弧菌生化反應有所不同。前者Vp陽性而后者為陰性。前者能產生強烈的溶血素,溶解羊紅細胞,在血平板上生長的菌落周圍出現明顯的透明溶血環,古典型霍亂弧菌則不溶解羊紅細胞。個別EL Tor型霍亂弧菌株亦不溶血。根據弧菌O抗原不同,分成Ⅵ個血清群,第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型:含AC者為原型(又稱稻葉型),含AB者為異型(又稱小川型),A、B、C均有者稱中間型(彥島型)。霍亂弧菌對熱,干燥,日光,化學消毒劑和酸均很敏感,耐低溫,耐堿。濕熱55℃,15分鐘,100℃,1~2分鐘,水中加0.5ppm氯15分鐘可被殺死。0.1%高錳酸鉀浸泡蔬菜、水果可達到消毒目的。在正常胃酸中僅生存4分鐘。
3、粘絲試驗溶液:溶解0.5g去氧膽酸鈉于100ml水中,擰緊瓶蓋保存于冰箱中,無需高壓滅菌。霍亂弧菌在鈣溶液中被乳化后,1min內形成粘液狀團塊。當粘塊從玻片上被拉出2cm—3cm時呈粘絲。
4、Hugh-Leifson葡萄糖肉湯(HLGB):
配方:
蛋白胨                 2.0g
酵母浸粉               0.5g
氯化鈉                 30.0g
葡萄糖                 10.0g
溴甲酚紫               0.015g
瓊脂                    3.0g
蒸餾水                 1000ml
制法:將各成分(溴甲酚紫除外)加入蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱溶解調節pH7.4,加入溴甲酚紫,混勻,分裝于15mm*150mm試管的1/3容量,121℃高壓滅菌15min。接種后覆蓋約1ml滅菌礦物油以檢查葡萄糖發酵。   
   

 

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