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中華人民共和國輕工行業標準——皺紋紙(節選)之二


錄入時間:2011-3-24 10:23:54 來源:豆丁網

A2 產品采集與樣品處理
  于同一批號的三個大包裝中至少隨機抽取15包小包裝樣品,三分之一用于測試,三分之一留樣,三分之一必要時復測用。樣品最小包裝不應有破裂,檢驗前不得啟開。
  在100級凈化條件下或超凈工作臺中用無菌方法至少打開5個小包裝,從中隨機準確稱取10 g樣品,剪碎后加入到100 mL滅菌生理鹽水中,振打80次或用混勻器充分混勻。每一種樣品共取30 g,分別接種3管生理鹽水樣液。
A3 細菌菌落總數測試方法
A3.1操作步驟
待上述樣液自然沉降后取上清液作菌落計數。共接種6個平皿,每個平皿中加入1 mL樣液,然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養瓊脂15 mL倒入平皿內,混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉平皿置37℃ 培養24 h后,計算平板上的菌落數。當平板上菌落數超過300時應稀釋后再計數。
A3.2 菌落計數及結果報告
菌落呈片狀生長的平板不宜采用;計數符合要求的平板上的菌落,按式(A1)計算結果:
  每克樣品細菌菌落總數(cfu/g)=平板上菌落平均數×10 (A1)
  所得結果超過標準值的10%,必須重復檢測一次,以兩次結果的平均數為最終結果。
  當菌落數在100以內時,按實有數報告,大于100時采用二位有效數字。
A4 大腸菌群檢測方法
A4.1 操作步驟
取樣液的上清液接種乳糖膽鹽發酵管。共接種3管,每管接種1 mL樣液,置37℃ 培養24 h,如不產酸也不產氣,則報告為大腸菌群陰性。
  如產酸產氣,則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板,置37℃ 培養18~24 h,觀察平板上菌落形態。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色,圓形,邊緣整齊,表面光滑濕潤,常具有金屬光澤,也有的呈紫黑色,不帶或略帶金屬光澤,或粉紫色,中心較深的菌落。
  挑取可疑大腸菌落1~2個進行革蘭氏染色鏡檢,同時接種乳糖發酵管于37℃培養24 h,觀察產氣情況。
A4.2 結果報告
凡乳糖膽鹽發酵管產酸產氣,乳糖發酵管產氣,在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落,革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌,可報告被檢樣品檢出大腸菌群。
A5 金黃色葡萄球菌檢測方法
A5.1 操作步驟
取樣液5 mL,加入到50 mL SCDLP培養液中,充分混勻,置37℃培養24 h。
  自上述增菌液中取1~2接種環,劃線接種在血瓊脂培養基上,置37℃培養24~48 h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色,大而突起,圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈。
  挑取典型菌落,涂片作革蘭氏染色鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌,排列成葡萄狀,無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況,應進行下列試驗:
  甘露醇發酵試驗:取上述菌落接種到甘露醇培養液中,置37℃培養24 h,發酵甘露醇產酸者為陽性。
  血漿凝固酶試驗
玻片法:取清潔干燥載玻片,一端滴加一滴生理鹽水,另一端滴加一滴兔血漿,挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合,5 min如血漿內出現團塊或顆粒狀凝塊,而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性,如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現象,再進行試管凝固酶試驗。
試管法:吸取1∶4新鮮血漿0.5 mL,放滅菌小試管中,加入等量待檢菌24 h肉湯培養物0.5 mL。混勻,放37℃溫箱或水浴中,每半小時觀察一次,24 h之內呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物各0.5 mL作陽性與陰性對照。
A5.2 結果報告:凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長,鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌,并能發酵甘露醇產酸,血漿凝固酶試驗陽性者,可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。
A6 溶血性鏈球菌檢測方法
A6.1 操作步驟
取樣液5 mL加入到50 mL匹克氏肉湯(A1.9)中,37℃培養24 h。
  將培養物劃線接種血瓊脂平板,37℃培養24 h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色,半透明或不透明,針尖狀突起,表面光滑,邊緣整齊,周圍有無色透明溶血圈。
  挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢,應為革蘭氏陽性,呈鏈球狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況,應進行下列試驗:
鏈激酶試驗:吸取草酸鉀血漿0.2 mL(0.01 g草酸鉀加5 mL兔血漿混勻,經離心沉淀,吸取上清液),加入0.8 mL滅菌生理鹽水,混勻后再加入待檢菌24 h肉湯培養物0.5 mL和0.25%氯化鈣0.25 mL,混勻,放37℃水浴中,2 min觀察一次(一般10 min內可凝固),待血漿凝固后繼續觀察并記錄溶化時間。如2 h內不溶化,繼續放置24 h后觀察,如凝塊全部溶化為陽性,24 h仍不溶化為陰性。
  桿菌肽敏感試驗:將被檢菌菌液涂于血平板上,用滅菌鑷子取每片含0.04單位桿菌肽的紙片放在平板表面上,同時以已知陽性菌株作對照,在37℃下放置18~24 h,有抑菌帶者為陽性。
A6.2 結果報告:鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌,血平板上呈現溶血圈,鏈激酶和桿菌肽試驗陽性,可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。
 

 

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