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青島海博瓷珠菌種保存管全面介紹

青島海博生物
錄入時間:2016-7-5 11:04:23 來源:青島海博生物

    瓷珠菌種保存管是實驗室保存菌種的容器,管內有12 顆表面凹孔小瓷珠用于細菌的吸附和 保存,可在保存周期內使用12 次(每次1 個)。菌種保存管使用過程中,將細菌接種在菌種保 存管內,放置于-20℃或-80℃環境中可長期保存(視不同菌種與保存溫度,一般可保存3-10 年), 同時菌種保存管的取用和保存較為便利(取用復蘇及保存菌株僅需1 分鐘)

    由于菌種保存管取用和保存便利,不僅可保存一般細菌,苛刻菌,以及霉菌、酵母菌等真菌 也可在低溫條件下通過菌種保存管保存,因此菌種保存管被廣泛應用于臨床領域(臨床藥敏試驗 菌株的保存)、疾控領域(監測分離到的菌株的保存)、菌種保存中心(菌株的日常取用與保存) 以及制藥企業(陽性對照菌株保存和取用)等領域。

產品原理

    細菌在適宜其生長的環境中(培養環境:需氧、厭氧、微需氧,培養溫度:35℃或25℃),會在 極短時間內(8-18 小時)經歷由調整期-對數期-穩定期-衰退期)四個生長周期(真菌需要培養7 天、酵母菌需要培養三天產生孢子后保存,具體情況需看對數期的時間確定)。菌種保存的最終目的,是能夠在以后的時間使用該菌種。要達到這個目的,一般同時結合以下的三方面的措施:

1.取生命力最旺盛的對數期階段的菌種,該階段菌種生命力最為頑強,能夠更好的耐受保存過程 中溫度的變化。

2.通過降低溫度,使細菌其進入“休眠狀態”,保存過程中該菌種處于最低的代謝活動。

3.降低細菌在降溫“休眠過程”和升溫“復蘇過程”中,溫度變化對菌種的傷害。

海博生物菌種保存管的保存原理,為目前較多實驗室所常用的甘油保存法的改進方法,可以 簡述為“甘油小瓷珠保存法”。

    產品保存時,將菌種刮取或轉移至菌種保存管中,上下顛倒保存管,重力作用下,菌種均勻 分布于凍存保護液中。將凍存管中的全部凍存液吸取出菌種保存管。密布凹孔的小瓷珠,擴大了 小瓷珠的表面張力,在表面張力作用下,每個小瓷珠的表面僅僅覆蓋著一層凍存保護液,而菌種則存在于這層保護液之中。

    產品使用時,從-20/-40/-80 冰箱中拿出菌種存管,輕輕晃動。由于此時的保存管內已沒有 聚集的液體,瓷珠在低溫下也會很容易相互分離,而不必像傳統甘油法保存時需要很長的甘油融 化時間。隨后,用接種針任取一瓷珠,就可直接在平板上劃線接種或置于增菌液中培養。 接種完成后,立即將該菌種保存管置于原有的保存環境中,由于此種方法能夠快速的取用菌株,因此,菌種保存管內部溫度的波動相當的小。因此,能夠極大避免保存溫度的大幅波動對的菌種的傷害。

注意事項

1、被保存的菌種要求是經過純化后培養18-24h 內的新鮮菌種(細菌18-24h,酵母菌需3 天, 形成孢子的微生物保存孢子,而放線菌和絲狀真菌需培養7 天后保存),不宜使用老化或未經鑒 定的菌種。

2、做厭氧菌保存時,應提供厭氧的環境,如厭氧箱、厭氧袋,菌種保存管中可通入氮氣來驅除 保存菌種時所引入的氧氣。菌種復蘇時,也要創造厭氧的環境。

3、菌種復蘇完成后,對使用菌株需要進行再次純化,以保證菌株的單一性。

4、菌種保存濃度必須要做3-4 麥氏比濁度,如接種濃度過低將會降低復蘇效果。

5、待保存于菌種保存管中的菌種完全乳化均勻吸附在多孔小瓷珠后,要將多余的菌種保存液吸 取出來并棄之,否則在復蘇時的凍融過程中會損傷菌株活性。

客戶問答:

1、為什么說明書上說可在常溫下保存一年,資料又說可以長期保存?

答:菌種保存管未使用前,可在常溫下保存1 年,使用后,低溫保存,使微生物活性保持到最低 代謝活動狀態,在-20℃可保存1-3 年,-80℃或液氮保存可保存5-10 年。不同菌種及不同的保 存溫度保存時間會有所不同。(例如:大腸、沙門等常規細菌-20℃我們目前可以保存到6 年)

2、 菌種保存管能保存霉菌及酵母菌嗎?

答:可以。對于霉菌等真菌需培養7 天進行保存,而酵母菌需培養三天將孢子洗脫下來進行保存, 保存管中的小瓷珠可以作為介質來吸附孢子和菌絲,相當于砂土保存法中砂土做為載體起到的作用。

3、所有的菌都能保存嗎?如果不是的話,什么樣的菌可以保存?什么樣的菌不可以保存?

答:可以。菌種保存的原理是DNA 復制時自發突變導致菌種退化,因此要創造代謝不活潑的狀 態,而菌種保存時使菌種進入休眠態(孢子、芽孢),并創造干燥、低溫、缺氧、缺營養的環境,創造 的環境越接近此狀態,所保存的菌種的時間就越長,所以從原理上講,所有菌種都可用這種方法保存, 但需要注意的是,由于苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細菌保存時,需-80℃ 或更低溫度保存,才可以做到更長期的保存。

4、我能用菌種保存管永久保存菌株嗎?

答:溫度越低,保藏效果越好。從目前的試驗數據及實際保存效果來看,-20℃可保存1-5 年,-80℃ 或液氮中可保存5-10 年,但需要注意的是所保存的菌種需每年抽檢進行生化特征的鑒定,確定菌株無變異。

5、為什么在使用時要將管內的液體盡可能多的吸出?

答:吸出液體可避免反復凍融形成的冰晶對菌株的損傷,加快復蘇的過程,因此,要盡可能的將與 菌種混勻后的保存液吸凈.而常用的甘油法,在復蘇的過程中需用水浴鍋快速溶解,在此過程中,對菌株傷害較大。

6、為什么在菌種保存時,要上下顛倒?為什么不能旋搖?

答:上下顛倒,可使菌懸液充分混勻,菌株充分、均勻地吸附到小瓷珠上,旋搖不利于菌懸液充分混勻,反而會使菌株全部沉淀于管底。

7、菌種保存管在使用前需要放置冰箱嗎?

答:本公司菌種保存管采用特殊生產工藝,并對產品進行長期留樣觀察,以及穩定性試驗,在使用前可以室溫存放1 年,因此在發貨過程等過程中室溫放置不會影響產品效果。

8、將菌株反復凍存,到底對菌株有什么影響?

答:低溫會使菌株細胞內的水分形成冰晶,從而引起細胞結構尤其是細胞膜的損傷。 細胞體積大者一般要比較小者對低溫更為敏感,而無細胞壁者則比有細胞壁者敏感。如果放到低溫(不是一般冰箱)進行冷凍時,會產生冰晶,冰晶呈針狀,極易導致細菌的嚴重損傷。用電鏡觀察,可見細菌的核膜上有大量針尖樣小孔,當從低溫下移出并開始升溫時,冰晶又會變大,故反復凍存,會對菌株造成極大損傷。

9、在使用后,菌種保存管的保存環境?需要-80℃冰箱嗎?

答:本公司菌種保存管采用的是低溫冷凍保存法,因此,使用后,需放置低溫環境,如-20℃、-80℃或液氮中保存,而且溫度越低,保存效果越好。用戶需根據菌種的保存要求選擇具體保存溫度。

10、為什么在取用菌株時,操作過程要求快速?

答:菌種保存復蘇的原則,要求慢凍快融,之所以要求快速,是因為在菌種復蘇的過程中, 長時間的 溶解過程會對所保存的菌種造成損傷,而YOCON 經過改良的保存方法最大程度的避免復蘇所造 成的影響,但我們還是建議遵循菌種的保存復蘇原則,保證所復蘇菌種的復蘇率。

11、為什么有時候菌種的保存效果不佳?

答:1、可能是由于保存后未將保存液吸盡,反復凍融形成冰晶損傷菌株細胞,影響了菌株活性。

2、確定所保存的菌種是否為對數生長期的菌種,我們建議普通菌種保存為18 小時內的新鮮菌種,而霉菌和酵母菌需要保存其對數生長期階段的菌種。

12、菌種保藏時為什么要進行分離純化?

答:分離純化后才能獲得單一菌株,單一菌株進行菌種保藏才有意義,防止菌種交叉污染和變異,這也是菌種保存的基本原則。

13、該產品能否用于菌種的運送,如果可以在什么條件下運送?

答:就目前試驗數據而言,我們只建議用于普通細菌的短期運送,對于苛刻菌及厭氧菌不能用此方法,并且在運送期間保存液不得吸出,2-8℃運送不超過5 天 ,運送到客戶手中,需重新純化。另外需要說明的是如弧菌屬的菌種需要常溫運送,其對2-8℃溫度及其敏感。

14、菌種保存管對于平板來說,對挑選菌落個數有要求嗎?還是將整個平板的菌落全部刮入管中?

答:對于要保存的細菌一般是要進行2-3 次的純化,要保證一個平板上的菌是由單一菌落傳代而來的,所以在細菌保存的過程中,為了保證制備的菌懸液可以達到3-4MCF,是可以將整個平板的的細菌全部刮到管中的,如果平板長的比較滿一般半個平板就夠用,具體用量也根據菌種的不同有所差異,如霉菌、酵母菌在保存時,不適合用濁度法。

15、對于液體培養基培養的純菌,是否也可以用咱們的菌種保存管?如果可以的話, 怎么操作?

答:是可以用的,如果液體培養基能保證是純菌的話,可以直接離心,棄掉上清,然后把保存管中液體吸進去充分混勻,然后再轉移到菌種保存管中,整個過程要注意無菌操作。不過,一般菌種保存管最好選擇平板菌落進行保存,因為液體培養基中有雜菌是不易觀察出來的。

16、為什么我保存在平板上的菌每隔一段時間就得重新傳一次,即使是放在溫度為2-8 度的冰箱中?

答:在2-8℃保存的菌種,并不是出于低代謝率的環境,所以此環境下保存的菌種極易變異,故一般一個月重新傳代一次,確定菌種有無變異,并且連續傳5 代后的菌種不能使用。

17、為什么說,如果有條件的話,菌種保存管最好置于-80 冰箱或液氮中?

答:因為,貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成,可極大降低冰晶形成對細菌的傷害,同時可為被保存的菌種創造更低的代謝環境,從而延長細菌保存的時間。

另附鏈接:

1 瓷珠菌種保存管- 產品詳情- 青島海博生物

http://opsycon.com/asphtml/product2243.htm

2 瓷珠菌種保存管視頻- 菌種保存與復蘇

http://opsycon.com/video/junzhongbaocun.asp


 

 

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